廣州艾基生物技術有限公司
Guangzhou IGE Biotechnology Co., Ltd.
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技術支持
致力于引進國外先進技術，為廣大科研工作者和醫(yī)療機構提供高質量 的科研技術支持 。
PCR產物經克隆后測序發(fā)現，引物處的堿基有錯誤，怎么辦？
A15:因為引物純度不可能是100%，因此，挑選克隆時，有可能挑選了雜質引物擴增出的PCR產物的克隆。此時，請重新挑選一個克隆測序，會得到正確的結果。如果挑選2 ~ 3個克隆測序情況還沒改觀，我們會免費重新合成引物并以最快的速度送到您的手里。如進行索賠時，按國際行業(yè)慣例，索賠范圍限于制品價格范圍之內。
能否根據引物電泳后EB染色后條帶的亮度對合成的引物進行定量？
A14:不能。因為EB是通過嵌入到核酸的雙螺旋間而使其著色的。合成的DNA分子為單鏈，只有通過自身回折形成局部發(fā)夾環(huán)結構或鏈間形成部分雙螺旋結構，才能被EB染色。由于不同引物的序列不同，形成雙螺旋的能力不同，因此染色能力不盡相同，也就不能根據EB染色帶的亮度來對合成的DNA進行定量。
合成的引物進行PCR反應時無目的條帶，如何解釋？
PCR反應失敗的原因很多，可以從以下幾個方面考慮:引物和模板是否配對，同源性有多大；引物本身是否有立體結構；PCR反應用試劑是否能正常工作；PCR儀是否工作正常；PCR反應條件是否合適；如果一切正常，還無法解決問題時，我們可以免費重新合成引物。
使用3%Agarose凝膠電泳分析合成的引物，發(fā)現有很多條泳帶？
對引物進行電泳一定要使用變性PAGE電泳。由于引物是單鏈DNA，容易形成復雜的立體結構，因此進行Agarose電泳時，容易出現多條泳帶，更無法用Agarose電泳進行定量了。
測定了引物的OD值后發(fā)現A260/A280<1.8，引物純度合格嗎？
由于核酸在260nm附近有強吸收，而蛋白質在280nm附近有強吸收，從生物體內提取核酸時，常用A260/A280比值來評價核酸純度(比值在1.8～2.0之間)，這一判斷是基于序列中A、G、C、T所占比例大致相同時的結果。而合成的DNA/RNA則不同，序列很短 (通常在20～30個堿基之間)，其中A、G、C、T各種堿基所占比例很不相同，由于各種堿基的摩爾消光系數不同，因此不同堿基構成的引物的A260/A280比值也不同，例如當序列中C、T堿基的含量高時，該比值會大大低于1.8。所以不能用A260/A280的比值來判斷引物的純度。
一般合成的引物末端有磷酸基團嗎？
沒有，5和3末端均為-OH基。如需要加磷酸基團，則需要使用修飾合成增加磷酸化。
如何檢測引物的純度？
實驗室方便的作法是用PAGE方法。使用加有7M尿素的一定濃度的聚丙烯酰胺凝膠進行電泳,<12個堿基的引物用20%的膠，12-60個堿基的引物用16%的膠，>60個堿基的引物用12%的膠，取0.2OD左右的引物，用尿素飽和液溶解或引物溶液中加入尿素干粉直到飽和，上樣前加熱變性(95oC,2mins)。加入尿素的目的一是變性，二是增加樣品比重，容易加樣。600V電壓進行電泳，一定時間后(約2-3小時)，剝膠，用熒光TLC板在紫外燈下檢測帶型，在主帶之下沒有雜帶，說明純度是好的(有時由于變性不充分，主帶之上可能會有條帶，乃是引物二級結構條帶)。
為何長鏈引物的合成費用比短鏈引物的要高？
通常在合成長鏈引物時，試劑的加入量要比短鏈引物多很多，尤其是大于90bp以上的引物，由于成本的增加，從而導致價格也要增加。
艾基生物可以為您合成多長的序列？
150堿基以下。
如何計算oligo的摩爾數？
1個OD值的Oligo的重量約為33 μg，而每個堿基的平均分子量一般按330道爾頓進行計算。因此， 合成oligo的nmol數一般按以下公式粗略地計算： nmole數=(OD值x33μg)/(堿基數x330)x1000=OD值/堿基數x100如果需要計算合成DNA的精確濃度，請按以下公式進行計算： nmole數=(OD值x1000)/[ (15.3xA#)+(7.4xC#)+(11.8xG#)+(9.3xT#) ]
oligo如何定量？
用紫外分光光度計在260nm波長測定溶液的吸光度來定量，測定時溶液的吸光度最好稀釋到0.2-0.8之間(吸光度太高或太低會有較大的誤差)。DNA干粉用一定體積的水充分振蕩溶解以后，取部分溶液稀釋到1ml并在1ml標準比色皿中測定其吸光度，即為所測體積的OD值，進而可以計算出母液的OD值。
oligo如何保存？
沒有溶解的引物非常穩(wěn)定，可以在-20℃下保存至少1年，溶解好的引物可以事先稀釋為100μmoL/L的儲存液，分裝數管保存于-20℃冰箱，可以保存至少半年以上（反復多次凍融會降低使用壽命）。使用前，將濃溶液稀釋成工作液后進行實驗。
oligo如何溶解？
我們的合成報告單給出了每OD引物稀釋為100μmoL/L（即100pmol/ul）濃度的加水量，您可以根椐您的實驗需要加入適量的無核酸酶的雙蒸水（PH>6.0）或TE緩沖液（PH 7.5-8.0），開啟瓶蓋溶解之前最好在3000-4000轉/分鐘的轉速下離心1分鐘，防止開蓋時引物散失。
艾基引物純化方式？
純化方式 詳細說明 C18 柱脫鹽 又稱為簡易反相柱，對DNA 有特異性吸附，可被有機溶液洗脫，但不會被水洗脫，因此能有效地去除鹽分。 R-PAGE 基于特異或反向層析法, 從合成好的產物中去除失敗序列，適于35 個堿基以下的引物。 PAGE 純化 PAGE 純化法是使用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，對引物DNA 進行分離，然后從凝膠中回收目的DNA。 HPLC 純化 HPLC 純化是使用高效液相色譜的原理，對引物DNA 進行純化。該方法用于分離純化或分析時能達到很高的純度和靈敏度。常用的有離子交換HPLC 和反相HPLC。
引物是如何合成的？
目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺三酯法。DNA合成儀有很多種,無論采用什么機器合成，合成的原理都相同，主要差別在于合成產率的高低，試劑消耗量的不同和單個循環(huán)用時的多少。（1） 去保護：加入Deblocking脫去堿基上5'- OH的保護基團 DMT ，獲得游離的 5'- OH；（2） 耦合：同時加入活化劑和新的堿基，新的堿基 5'- OH仍然被 DMT 保護，3' 端被活化與溶液中游離的 5'- OH發(fā)生耦合反應；（3） 封閉：耦合反應中極少數 5'- OH沒有參加反應 ，用封閉試劑終止其后繼續(xù)發(fā)生反應；（4） 氧化：加入氧化劑使其由核苷亞磷酸酯形成更穩(wěn)定的核苷磷酸酯。合成后處理：切割與脫保護基：將合成好的寡核苷酸…
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