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pLVX-LexA-EGFP-CD63 質(zhì)粒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

          pLVX-LexA-EGFP-CD63，即Lentivirus expressing EGFP-CD63 fusion protein，是艾基自行研發(fā)的一種可以在大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞(包括原代細(xì)胞和干細(xì)胞)中通過(guò)CMV啟動(dòng)子表達(dá)人源CD63-EGFP融合蛋白的重組慢病毒。本產(chǎn)品可用于外泌體的示蹤研究，用于研究外泌體的形成、分泌、靶向和運(yùn)輸機(jī)制。本產(chǎn)品帶有嘌呤霉素 (Puromycin)抗性基因，感染細(xì)胞后可以使用嘌呤霉素篩選穩(wěn)定株。

          外泌體(Exosome)是膜包裹的細(xì)胞外囊泡(Extracellular vesicles, EVs)，直徑約為40-160nm，具有脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)，天然存在于血液、尿液、腦脊液，以及體外培養(yǎng)細(xì)胞的上清液中[1]，幾乎所有類型的細(xì)胞都可以產(chǎn)生并釋放外泌體[2]。如圖1所示，細(xì)胞膜內(nèi)吞(Endocytosis)依次形成初級(jí)內(nèi)體 (Early sorting endosome ESE)、次級(jí)內(nèi)體(Late sorting endosome , LSE) 和多囊泡體(Multivesicular body, MVB) ，其中多囊泡體包含腔內(nèi)囊泡(Intraluminal vesicles, ILVs) 。多囊泡體與細(xì)胞膜融合形成外泌體，外泌體攜帶多種來(lái)自其母體細(xì)胞的成分(包括核酸、蛋白質(zhì)、脂類和代謝物等)釋放到胞外基質(zhì)中[3]。外泌體可以被附近或遠(yuǎn)距離的細(xì)胞識(shí)別和融合，是細(xì)胞間進(jìn)行相互調(diào)控的重要媒介，參與了癌癥、神經(jīng)退行性病變和炎癥性疾病等多種疾病的發(fā)病過(guò)程，影響細(xì)胞多方面的的功能[4-5]。

圖1. 外泌體的形成原理及其攜帶的母體細(xì)胞成分示意圖。

          外泌體標(biāo)志蛋白（Protein biomarkers for exosome），也稱外泌體蛋白標(biāo)志物（Protein markers for exosome），可以用于鑒定、觀察、標(biāo)記和純化外泌體。據(jù)外泌體庫(kù) ExoCarta（http://www.exocarta.org）統(tǒng)計(jì)，來(lái)自不同生物、細(xì)胞類型和體液的外泌體中已發(fā)現(xiàn) 9769 種蛋白質(zhì)，ExoCarta 列出了 100 種常見外泌體蛋白標(biāo)志物（http://exocarta.org/exosome_markers_new），其中 CD9、CD63、CD81、ALIX、Flotillin、Ceramidase 和 TSG101 是最常用的外泌體蛋白標(biāo)志物（如圖 2 所示）。CD63 在人體中由 CD63 基因編碼的蛋白質(zhì)抗原，是跨膜四超家族（Transmembrane 4 superfamily）成員之一，為中次跨膜蛋白 [1]，大量存在于細(xì)胞外囊泡的表面，也會(huì)出現(xiàn)在普通的細(xì)胞膜表面。CD63 是最常用的外泌體蛋白標(biāo)志物之一，被認(rèn)為是調(diào)控細(xì)胞外囊泡產(chǎn)生和胞內(nèi)物質(zhì)分選的關(guān)鍵因子 [6] 。

圖2. 常見的外泌體蛋白標(biāo)志物示意圖。

? pLVX-LexA-EGFP-CD63感染HEK293T細(xì)胞后的表達(dá)效果如圖3所示

TU                                                          1×10^5                                                          1×10^6

圖 3. 艾基生產(chǎn)的pLVX-LexA-EGFP-CD63感染HEK293T細(xì)胞的效果圖. 24孔板每孔100,000個(gè)細(xì)胞，

培養(yǎng)過(guò)夜后用相應(yīng)的病毒TU數(shù)進(jìn)行感染，病毒感染72小時(shí)后熒光顯微鏡實(shí)拍相同大小視野效果圖。

實(shí)際檢測(cè)效果會(huì)因檢測(cè)儀器、實(shí)驗(yàn)條件的不同而存在差異，本圖僅供參考。

       pLVX-LexA-EGFP-CD63質(zhì)粒的主要信息如下：

        pLVX-LexA-EGFP-CD63質(zhì)粒(9855bp)的圖譜如下：

        pLVX-LexA-EGFP-CD63質(zhì)粒中沒有的酶切位點(diǎn)包括：

        AbsI, AfeI, AgeI, AhlI, AjuI, AlfI, AloI, Aor51HI, AscI, AsiGI, AsiSI, AsuII,

        BaeI, BarI, BclI, BcuI, BoxI, Bpu14I, BshTI, Bsp119I, BspT104I, BssNAI,

        Bst1107I, BstBI, BstHPI, BstPAI, BstXI, BstZ17I, CciNI, Csp45I, CspAI, Eco47III,

        EcoT22I, FbaI, FspAI, HpaI, I-CeuI, I-PpoI, I-SceI, Ksp22I, KspAI, MauBI,

        Mph1103I, MreI, MssI, NotI, NsiI, NspV, PacI, PaeR7I, PalAI, PasI, PI-PspI,

        PI-SceI, PinAI, PmeI, PshAI, PspXI, PsrI, RgaI, SbfI, SdaI, SfaAI, SfiI,

        Sfr274I, SfuI, SgfI, SgrAI, SgsI, SlaI, SmiI, SpeI, SrfI, Sse8387I, SwaI, XbaI,

        XcmI, XhoI, Zsp2I

        pLVX-LexA-EGFP-CD63質(zhì)粒單酶切位點(diǎn)包括：

        AhdI, ApaI, AvrII, BamHI, BfuAI, BlpI, BmgBI, BmtI, BsaBI, BsiWI, BspDI, BspMI,

        BsrGI, BstEII, Bsu36I, ClaI, CsiI, DrdI, EcoRI, FseI, FspI, KflI, MfeI, MluI,

        NdeI, NheI, NruI, PaqCI, PflFI, PpuMI, PspOMI, PstI, PvuI, RsrII, SexAI, SgrDI,

        SmaI, SnaBI, SphI, SspI, TspMI, Tth111I, XmaI

        pLVX-LexA-EGFP-CD63質(zhì)粒推薦使用的測(cè)序引物序列如下：

        CMV-F primer (2659-2679): 5'-CgCAAATgggCggTAggCgTg-3'

        pLVX-LexA-EGFP-CD63的全序列信息請(qǐng)參考艾基網(wǎng)站上該質(zhì)粒的信息。

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        -80oC保存。

注意事項(xiàng)

        本質(zhì)粒未經(jīng)艾基書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。

          本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

        為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說(shuō)明：

1. 首次使用1μg包裝的本產(chǎn)品時(shí)，請(qǐng)先取少量本質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，進(jìn)行質(zhì)粒小量、中量或大量抽提后再用于后續(xù)用途。抽提獲得的質(zhì)?？梢酝ㄟ^(guò)酶切電泳進(jìn)行鑒定，或通過(guò)測(cè)序進(jìn)行鑒定。

2. 100μg包裝的本產(chǎn)品質(zhì)粒濃度為0.25μg/μl，共400μl。可以直接用于轉(zhuǎn)染細(xì)胞。