服務(wù)介紹 Service Introduction
艾基生物擁有多臺ABI 3730XL測序儀, 有近十年的 Sanger 測序經(jīng)驗,針對樣品的復(fù)雜程度摸索出一系列的解決方案,并且在 Sanger 測序平臺的基礎(chǔ)上將應(yīng)用擴展至分子生物學(xué)上游的多個領(lǐng)域,包括:SNP 檢測,片段分析, SSR/STR 分型, 基因檢測, 菌種鑒定, 線粒體測序, 基因組測序,跑板等服務(wù)。
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平臺優(yōu)勢 Service Advantages
質(zhì)量穩(wěn)定:精確讀長達 800 bp 以上,有效讀長度超過 900 bp。
準確度高:QV20+ 和 CRL 值 >1000。
時效性強:日均處理量 >2000 個反應(yīng),結(jié)果及時、準確,最快 24 小時出結(jié)果。
困難模板:成熟的方案應(yīng)對 High GC,AT rich,發(fā)夾結(jié)構(gòu),重復(fù)序列。
一站式服務(wù):基因組提取、引物設(shè)計、PCR 擴增、Primer Walking、測序及結(jié)果分析。
技術(shù)流程 Technical Procedures
樣品要求 Sample Requirenments
【菌液和平板】
需過夜培養(yǎng)的菌液,至少提供 200 ul;無需培養(yǎng)可直接提取的樣品,請?zhí)峁?nbsp;2-4 ml 過夜培養(yǎng)的菌液;
樣品請注明抗性,常備抗生素:氨芐青霉素 (Amp)、卡那霉素 (Kan)、氯霉素 (Chl);
若菌液所含質(zhì)粒為超低拷貝,請直接提供質(zhì)粒;
除大腸桿菌以外的菌液,請直接提供質(zhì)粒。
【質(zhì)?!?/span>
濃度 >50 ng/ul,總體積不少于 10 ul;
請確保質(zhì)粒溶解于滅菌的雙蒸水中,TE 溶解的質(zhì)粒會造成反應(yīng)失敗。
【PCR 產(chǎn)物】
已純化 PCR 產(chǎn)物:請確保 DNA 溶解于滅菌的雙蒸水中,濃度 >30 ng/ul,總體積不少于 20 ul。
未純化 PCR 產(chǎn)物:請注明片段長度,條帶是否單一,原液總體積不少于 20 ul;
片段 < 100 bp 建議克隆后測序,片段 > 4 kb 建議分段擴增后測序。
【測序引物】
濃度 ≥ 5 pmol/ul,總體積不少于 10 ul,并確保溶解于滅菌的雙蒸水中;
測序引物長度盡量控制在 20-30 bp,引物過短或過長均會影響測序質(zhì)量;
含兼并堿基熒光標記或修飾的引物不適用于測序。
注意事項 Notes
樣品登記表需按要求填寫詳細,避免問題訂單帶來的實驗延誤;
確保樣品與登記表名稱一致,可包含“字母”“數(shù)字”“—”;請避免出現(xiàn) 漢字、拉丁字母及其他特殊字符;
填寫“測通”的樣品會默認拼接,“雙向”測序的樣品如需拼接請注明;
如樣品為菌液或平板,請注明抗生素類型;
若測序引物不是通用引物,請自備或委托合成,選擇引物類型(通用 / 新送 / 已送 / 需合成)并注明濃度;
若送測質(zhì)粒不是常用載體,通用引物請寫明引物全稱;
未純化 PCR 產(chǎn)物若已檢測為單一條帶,請在訂單中注明,可大大提高測序成功率;
存在特殊結(jié)構(gòu)的,如:High GC、AT rich、重復(fù)序列、發(fā)夾結(jié)構(gòu)請在訂單上備注;
大量樣品送測時,請使用電子訂單,方便核對且不易出錯。